| 产品名称 | 嘌呤霉素盐酸盐（Puromycin dihydrochloride） |
| 货号 | SNSP-012 |
| 规格 | 25mg/瓶 |
| 简介 | 嘌呤霉素是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，可以通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌。 它作为氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。但是嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。主要用来筛选或者维持培养含Pac基因(puror)抗性的哺乳动物稳定转染细胞。一般真核细胞培养的推荐工作浓度为 1-10 μg/mL。 |
| 使用方法 | 使用方法示例：（仅供参考） 1.嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例） 嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。 1） Day 1：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜； 2） Day 2：a）准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）；b）往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞； 3） Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率（根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基）； 5） 每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物最低浓度。 2. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选 等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。 1）细胞转染48h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养； 注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。 2）每隔2-3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基； 3）筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。注意：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天； 4）转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备； |
| 外观 | 白色粉末 |
| 存储条件 | 避光,-20°C储存 |
| 保质期 | 1年 |
注意事项：
1.嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放，配置成溶液后避免反复冻融。
2.实验过程中，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3.该产品仅供科研使用，不得用于诊断或临床实验。
