| 产品名称 | 细胞裂解液（中等强度） |
| 货号 | SNR-001 |
| 规格 | 100ml |
| 简介 | 本产品可用于动物、植物细胞或组织样本，使用该裂解液时，用户可根据具体用途添加或不添加特定的抑制剂。裂解缓冲液得到的蛋白样品可使用 BCA 蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度。 本公司生产的细胞裂解液经多种样本裂解验证，裂解产物适合 PAGE、 Western、免疫沉淀(IP)、co-IP 和 ELISA 等多种实验使用。 |
| 使用方法 | A. 组织样本 组织样本一般制成组织匀浆，处理方法如下： 1）使用干净的工具解剖目标组织，尽量置于冰上，以防被蛋白酶降解。（暂时不处理的组织，置于圆底微量离心管中，浸入液氮中“速冻”，在-80℃ 下存储样品备用） 2）用预冷的 PBS 缓冲液（0.01M，pH=7.4）洗涤组织去除残留的血液，称重后备用。若组织块较大，需先剪碎。 3）加入裂解液，若后续需要进行免疫检测，建议不要添加 NP-40，Triton X-100 和高浓度 DTT 的组分，会抑制抗原抗体反应。在冰上研磨组织（加入裂解液的体积取决于组织的重量。一般情况下，每 1 克组织碎片应使用 9mL 裂解液）。需要时可以加入一些蛋白酶抑制剂，如 1mMPMSF。得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理（超声破碎过程中，需冰浴降温；反复冻融法可重复 2 次）。 4）将制备好的匀浆液于 5000×g 离心 5 分钟，留取上清即可检测。或分装冻存于-20℃或-80℃。 5）根据实验需要，组织匀浆样本可先定量总蛋白，以便于统计分析数据，一般调整总蛋白浓度至 1-3mg/mL。 注意事项：若为皮肤组织，离心后，需去除上层脂肪，以及下层沉淀，取中间层样本用于检测。 B. 细胞样本 悬浮细胞： 1.1 在 2-8℃，2500rpm 离心 5min，收集细胞。 1.2 加入预冷的 PBS，轻轻混匀，2-8℃，2500rpm 离心 5min，收集细胞。 1.3 加入 0.5-1mL 裂解液，若后续需要进行免疫检测，建议不要添加 NP- 40，Triton X-100 和高浓度 DTT 的组分，会抑制抗原抗体反应。需要时可以加入一些蛋白酶抑制剂，如 1mM PMSF，置于冰上，裂解 30min- 1h。裂解过程中可用枪头吹打或间断摇动离心管，使蛋白充分裂解， 出现黏糊状是 DNA，可以使用超声波破碎 DNA（用超声波 3-5mm 探头，功率 150-300W， 冰上超声处理样品，工作 1-2 s，停止 30 秒， 3-5 个循环）。 1.4 裂解或超声破碎完成，2-8℃，10000rpm 离心 10min，上清移入 EP管中，立即用于检测，或分装于-80℃冻存备用。 贴壁细胞： 2.1 吸走上清液，加入预冷的 PBS 洗三次。 2.2 加入 0.5-1mL 裂解液及适量蛋白酶抑制剂（具体要求同悬浮细胞），用细胞刮轻轻刮下贴壁细胞。 2.3 细胞悬液转入离心管中，置于冰上，裂解 30min-1h，或者配合超声波破碎（同悬浮细胞）。 2.4 裂解或超声破碎完成，2-8℃，10000rpm 离心 10min，上清移入 EP管中，立即用于检测，或分装于-80℃冻存备用。 |
| 浓度 | 1X |
| 外观 | 无色透明液体 |
| 存储条件 | -20℃（避免反复冻融） |
| 保质期 | 6个月 |
注意事项：
1. 细胞裂解液裂解时若出现大量凝胶状物质，建议使用超声波辅助破碎，超声波可有效打断 DNA，DNA 成为片段后不容易干扰试剂盒工作。
2. 注意冻存保存，避免反复冻融，反复冻融或长时间 2-8℃保存可能影响裂解效果。
3. 该产品仅供科研使用，不得用于诊断或临床实验。
