| 货号 | SNM-IS-SF001 |
| 产品名称 | 昆虫细胞无血清培养基 |
| 产品规格 | 500mL |
| 产品简介 | 尚恩生物研发的昆虫细胞无血清培养基成分包括氨基酸、维生素、生长因子、微量元素和其他有效成分，为化学成分明确的无血清细胞培养液，适用于28℃、空气环境下SF9、Hi-five及其它昆虫细胞的中、高密度悬浮培养及重组蛋白质表达。 本无血清培养基经微生物检测，不含细菌、真菌、支原体，内毒素低于1EU/mL，有效满足细胞培养需要。 |
| 产品优势 | ✅️化学成分明确，无动物成分，避免动物源污染； ✅️性能稳定，品质可控，批间差小 ✅️适用大部分昆虫细胞系培养； ✅️无需复温预热可以直接使用； ✅️无血清体系，转染无需更换培养体系； ✅️满足重组蛋白高表达需要，适用于发酵罐生产； |
| 产品效果 | SF9-S( SNL-170S)细胞培养曲线
SF9-S细胞以0.5x10^6cell/mL接种，每日计数，结果整体细胞增殖速度、最大生长密度接近进口产品，高于国产同类产品； |
| 使用方法 | 1.细胞的换液与传代 （1）从液氮罐中取出的冻存细胞或用干冰运输的细胞请依照下述（2.细胞的冻存与复苏）方法进行细胞复苏和培养； （2）细胞传代时，需先做细胞计数，确认密度后无需离心细胞，可直接将细胞悬液依照所需比例兑入培养液中。传代后的细胞密度应控制在在0.3×10^6 cells/mL左右，一般每4天需传代1次，或传代密度为0.6×10^6 cells/mL，一般每隔3天需传代1次。本培养液可支撑的最高细胞密度约为13×10^6 cells/mL，细胞在达到此密度时存活率一般仍可保持在95%以上； （3）若在震荡培养过程中出现死细胞过多的状况，可接种低细胞密度（5×105cells/mL以下）进行静置培养，待细胞恢复到正常活率后再进行震荡培养。 2.细胞的冻存与复苏 2.1冻存 （1）用细胞培养液制备7.5% 二甲基亚砜（DMSO）细胞冻存液，或使用尚恩生物非程序性细胞冻存液（无血清）（SNR-006）； （2）将细胞培养至对数生长期（密度约为6×10^6 cells/mL左右），计数并离心收集细胞； （3）用细胞冻存液将离心的细胞以5-10×10^6 cells/mL的浓度重悬； （4）将细胞悬液分装到标记好的冻存管内，确保拧紧管盖使其完全密封； （5）冻存管放置于常温的程序冻存盒后，冻存盒放入-80℃冰箱中过夜； （6）次日将冻存管转移至液氮内长期保存。此细胞转移过程需尽可能快速完成（建议在2min内），如果在此过程中冻存管温度升至-50℃以上，细胞则可能会迅速受损。 2.2复苏 （1）从液氮罐中取出细胞冻存管，立刻放置于37℃的温水中，快速摇晃直至管内冰晶完全融化或融化至仅剩余米粒大小冰晶； （2）解冻后用75%乙醇彻底擦拭冻存管，1000rpm离心1min，弃去含有冻存液的上清液。如使用无血清细胞冻存液，可直接将复苏后的细胞转移至已添加293细胞无血清培养液的摇瓶中重悬即可； （4）细胞中加入一定量的新鲜培养液，使细胞密度为0.6-1.0×10^6 cells/mL，接种于摇瓶中震荡培养； （5）培养3-6天后对细胞进行计数，观察细胞密度和存活率是否上升。若细胞密度达到3-6×10^6 cells/mL，可对细胞进行传代，一般细胞传代1-2次后即可恢复正常的生长状态； （6）若化冻后细胞密度过低，可先接种于培养瓶中静置培养，待其密度恢复至0.6-1.0×10^6 cells/mL时，再转移至培养箱摇床中震荡培养。 |
| 存储条件及保质期 | 2-8℃避光保存，一年； 注意：勿冷冻该培养基，避光保存、勿照紫外，使用后尽快放回保存温度。 |
注意事项：
1.培养箱摇床参数设置建议：温度27-28℃，无需二氧化碳，转速≤120rpm（振幅26）；不同振幅摇床计算公式如下：如振幅是50，按照公式计算：m×ω12×262=m×ω22×502 ，所以ω1和ω2的关系是：ω1≈1.4ω2，就是86rpm左右。
2.如使用其它品牌培养基，建议逐步过渡本培养基，让细胞持续传代数周时间，观察细胞活率及扩增速度，等细胞恢复正常生长状态后，再做下一步实验。
3.若细胞密度及活率降低处理方法：
（1）当细胞存活率为80%-95%时：将细胞离心去上清，用新鲜培养液重悬，使其密度为1×10^6 cells/mL，接种于摇瓶中振荡培养。每天观察细胞是否增殖，若有增殖，继续培养，直至细胞密度为8×10^6 cells/mL时方可传代。传代密度继续使用3×10^6 cells/mL，直至细胞存活率恢复至95%以上时，可将传代密度恢复至0.3-0.6×10^6 cells/mL。
（2）当细胞存活率为60%-80%时：将细胞离心去上清，用新鲜无血清培养基重悬，使其密度为0.5×10^6 cells/mL，接种于培养瓶中静置培养。每两天观察一次细胞是否生长，若细胞有生长，继续培养至细胞密度为2.0×10^6 cells/mL，传代至0.5×10^6 cells/mL于培养瓶中静置培养。重复上述过程，直至细胞活率大于90%时，可转移至摇瓶中培养，此时接种密度应不低于2.0×10^6 cells/mL。在静置培养过程中若发现有细胞贴壁，可继续培养。当细胞密度达到一定程度时，部分细胞会自然脱落，继续贴壁的细胞则可以借助移液管的轻微吹打脱离培养瓶。
（3）细胞存活率小于60%时：丢弃细胞，重新获取细胞。
4.细胞结团：检查是否在培养液中添加了其它物质，若使用可重复使用的玻璃摇瓶，需检查瓶子是否清洗干净。如果结团细胞成球状，可能是因为添加了其它外源物质或洗涤剂；如果结团细胞成片状或不规则的松散结构，可能是因为摇瓶有上一次培养时没洗干净的残留物粘附于瓶身，或因细胞存活率较低所致。
5.谨慎操作，避免污染，开封后重新保存时需要在瓶口封上封口膜避免污染；
6.本产品仅限供科研使用，不可用于医药、临床等领域。
