一、MM.1S-luc细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | MM.1S-luc(人多发性骨髓瘤细胞（luc标记）) |
| 细胞别称 | MM.1S+luc；MM.1S（luc） |
| 细胞货号 | SNL-769 |
| 来源 | 多发性浆细胞性骨髓瘤；女性；45岁 |
| 细胞形态 | 淋巴母细胞样(圆形或不规则形) |
| 细胞类型 | |
| 生长特性 | 半贴壁细胞 |
| 收录 | 自转 |
| 生物安全等级 | 2 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | MM.1S-luc细胞是通过慢病毒转染MM.1S细胞的方式使之携带luc基因，为稳定转染luc的细胞，但随细胞传代次数的增加，其luc荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为1μg/mL嘌呤霉素的完全培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含2μg/mL嘌呤霉素的完全培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为5μg/mL。若筛选过程中，漂浮细胞大于60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约80%，可再次加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5μg/mL嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药完全培养基正常培养。 |
二、MM.1S-luc细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.轻轻吸走培养上清，留2-3ml培养基轻轻吹打细胞面吹下细胞； 2.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清； 3.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 4.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 半贴壁细胞会附着瓶底，但贴壁不紧，轻轻吸取培养基轻轻吹打细胞面就会脱落，不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养，更适合吹打细胞操作，吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响。 |
三、MM.1S-luc细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞半贴壁圆形生长，部分悬浮圆形，传代时均可收集培养，换液时将悬浮细胞离心收集后重新接回原瓶，若贴壁细胞较多活性较好时可以不要悬浮的细胞； 2.传代有部分细胞碎片可以换液后用PBS润洗细胞清除，使用的PBS需要恢复到室温，加入时不要冲到细胞面，润洗尽量轻柔； 3.该细胞生长偏慢，比较容易死亡，不建议没有相关细胞操作经验的客户单独培养该细胞； 4.细胞培养时黑点可能会比较多，属于正常情况，黑点较多时及时换液清除即可，具体原因参见培养操作说明2、3条； 5.冻存细胞复苏后需要较长时间才能恢复正常生长状态； 6.嘌呤霉素筛选可以维持荧光强度；
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