一、NK-92细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | NK-92(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞) |
| 细胞别称 | NK92；NaturalKiller-92；NK-92.05；Neukoplast；aNK |
| 细胞货号 | SNL-405 |
| 来源 | NK细胞；淋巴瘤/白血病；男性；50岁 |
| 细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 悬浮细胞 |
| 收录 | 中科院NCACC |
| 生物安全等级 | 2 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | MEMα+12.5% FBS+12.5% HS+0.2mM Inositol+0.1mM β-mercaptoethanol+0.02mM Folic Acid+100-200U/mL recombinant IL-2+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92细胞对很多恶性细胞有细胞毒性，铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞(经过照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的体外免疫清扫而不危及血细胞的功能。NK-92细胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。NK-92细胞依赖于重组IL-2的存在，低至10U/mL的剂量足以维持增殖；在缺乏IL-2的情况下，细胞将在72小时内死亡。ATCC通过PCR证实该细胞系Epstein-Barr病毒DNA序列呈阳性。NK-92细胞可以用于3D细胞培养、免疫学研究、毒理研究，也是一种合适的转染宿主。 |
二、NK-92细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清； 2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 3.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 部分悬浮细胞会附着瓶底，轻轻晃动培养基或者吹打细胞面就会脱落，不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养，更适合吹打细胞操作，吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、NK-92细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80 度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20 度静置 2h 后转入-80 度过夜，第二天转入液氮保存。 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞增殖偏慢，均为悬浮生长，大部分细胞聚集成团，少数分散的细胞，并且细胞间隙会有较多的死细胞和细胞碎片； 2.该细胞对温度，吹打力度，培养条件均很敏感；培养基、PBS等建议复温至37℃再使用，吹打力度过大容易造成大量细胞死亡； 3.该细胞对培养基及血清要求较高，强烈建议选择尚恩生物NK92专用培养基（货号SNLM-405）培养； 4.该细胞冻存难度较大，建议使用90% FBS+10%DMSO冻存液配方冻存； 5.建议悬浮细胞密度维持在1E5-5E5/mL之间，密度过低或者过高可能会影响细胞状态；
我们推荐使用尚恩生物 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞专用培养基（产品货号：SNLM-405）作为NK-92(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞)的专用培养基。
