一、AE-1细胞基本属性 |
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细胞名称 | AE-1(小鼠杂交瘤细胞(抗AChE)) |
细胞别称 | AE1 |
细胞货号 | SNL-260 |
来源 | 杂交瘤细胞;B淋巴细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
细胞类型 | 杂交细胞 |
生长特性 | 悬浮细胞 |
收录 | ATCC |
生物安全等级 | 1 |
致瘤性 | |
培养条件 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
培养环境 | 空气,95% ; 二氧化碳 (CO2),5% |
细胞简介 | AE-1细胞是用纯化的人红细胞乙酰胆碱脂酶免疫实验动物,并将脾细胞与SP2/O-Agl4骨髓瘤细胞融合。AE-1细产生的IgG1亚型单抗与人及猴的乙酰胆碱脂酶结合,但AE-1细胞反应位点与AE-2的抗原表位不同。AE-1细胞鼠痘病毒阴性。 |
二、AE-1细胞培养操作 |
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换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.混匀细胞,收集细胞培养基,900rpm离心3-5min,弃上清; 2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 3.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大,注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、AE-1细胞冻存操作 |
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冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
Tips:1.细胞附着瓶底生长,部分悬浮,收集细胞注意附着细胞和悬浮细胞均需收集; 2.细胞培养时黑点可能会比较多,具体原因参见培养操作说明2、3条; 3.杂交瘤细胞对培养体系要求较高,注意使用优质培养基及血清培养细胞; 4.细胞培养代数增加可能出现返祖现象,若抗体分泌较低可以考虑对细胞进行亚克隆筛选。
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