一、35.1细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | 35.1(小鼠杂交瘤细胞抗CD2) |
| 细胞别称 | 无 |
| 细胞货号 | SNL-245 |
| 来源 | 杂交瘤细胞；B淋巴细胞 |
| 细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
| 细胞类型 | 杂交细胞 |
| 生长特性 | 悬浮细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | 35.1细胞是用佛波醇肉豆寇酸(PMA)激活的人T淋巴细胞免疫获得的脾细胞与NSI/1骨髓瘤细胞融合，获得的一种可以产生单抗（IgG2a亚型）的杂交瘤细胞。35.1细胞产生的抗体与人T细胞表面蛋白Tp50(CD2)反应，抗体可以抑制抑制T细胞增殖反应和细胞毒性，但不抑制抗体倡导的细胞毒反应。 |
二、35.1细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清； 2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 3.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 部分悬浮细胞会附着瓶底，轻轻晃动培养基或者吹打细胞面就会脱落，不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养，更适合吹打细胞操作，吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、35.1细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80 度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20 度静置 2h 后转入-80 度过夜，第二天转入液氮保存。 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞附着瓶底生长，部分悬浮，收集细胞注意附着细胞和悬浮细胞均需收集； 2.细胞培养时黑点可能会比较多，具体原因参见培养操作说明2、3条； 3.杂交瘤细胞对培养体系要求较高，注意使用优质培养基及血清培养细胞； 4.细胞培养代数增加可能出现返祖现象，若抗体分泌较低可以考虑对细胞进行亚克隆筛选。
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