一、AtT-20细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | AtT-20(小鼠垂体瘤细胞) |
| 细胞别称 | AtT20；AtT20；ATT-20 |
| 细胞货号 | SNL-239 |
| 来源 | 垂体瘤 |
| 细胞形态 | 圆形成串或贴壁伸展 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 悬浮细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | F12K+15% HS+2.5% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 37℃；5% CO2；饱和湿度 |
| 细胞简介 | AtT-20细胞于1966年10月由G.Sato及其同事从最初由J.Furth等人在LAF1小鼠中建立的小鼠垂体瘤细胞在动物和细胞培养中交替传代后建立的早期培养物中克隆出来，目前AtT-20克隆现在已在体外培养，无需交替动物传代。AtT-20细胞可以分泌促肾上腺皮质激素 (ACTH)。AtT-20细胞生长时不贴壁，而结成细胞团悬浮生长或附着瓶底。研究表明，AtT-20细胞能抗脊髓灰质炎病毒。AtT-20细胞经检测鼠痘病毒呈阴性，是一种合适的转染宿主。 |
二、AtT-20细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清； 2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 3.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 部分悬浮细胞会附着瓶底，轻轻晃动培养基或者吹打细胞面就会脱落，不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养，更适合吹打细胞操作，吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、AtT-20细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80 度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20 度静置 2h 后转入-80 度过夜，第二天转入液氮保存。 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞悬浮生长，大部分聚集成葡萄串状生长，太大团块应及时吹散避免中央细胞营养不足死亡，小团块无需处理，部分细胞贴壁伸展形态； 2.细胞生长偏慢，注意控制传代密度不要过低；
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