一、NK-92MI细胞基本属性 |
|
细胞名称 | NK-92MI(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞) |
细胞别称 | NK-92MI;NK-92mi;NK92-MI;NK92MI;NK-92transfectedwithMFG-Hil2 |
细胞货号 | SNL-195 |
来源 | NK细胞;淋巴瘤;男性;50岁 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
细胞类型 | 肿瘤细胞 |
生长特性 | 悬浮细胞 |
收录 | 中科院NCACC |
生物安全等级 | 2 |
致瘤性 | |
培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
细胞简介 | NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株,亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化,可能由于载体整合到基因组DNA中,转化是稳定的。NK-92MI细胞细胞对很多恶性细胞有细胞毒性;铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征:CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性;CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高,而亲本细胞不合成表达。1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体,其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体,处理后6周,用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测,结果都呈阴性。 |
二、NK-92MI细胞培养操作 |
|
换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.混匀细胞,收集细胞培养基,900rpm离心3-5min,弃上清; 2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 3.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 部分悬浮细胞会附着瓶底,轻轻晃动培养基或者吹打细胞面就会脱落,不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养,更适合吹打细胞操作,吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、NK-92MI细胞冻存操作 |
|
冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80 度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20 度静置 2h 后转入-80 度过夜,第二天转入液氮保存。 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
Tips:1.细胞增殖偏慢,均为悬浮生长,大部分细胞聚集成团,少数分散的细胞,并且细胞间隙会有较多的死细胞和细胞碎片; 2.该细胞对温度,吹打力度,培养条件均很敏感;培养基、PBS等建议复温至37℃再使用,吹打力度过大容易造成大量细胞死亡; 3.该细胞对培养基及血清要求较高,强烈建议选择尚恩生物NK92-MI专用培养基(货号SNLM-195)培养; 4.该细胞冻存难度较大,建议使用90% FBS+10%DMSO冻存液配方冻存; 5.该细胞复苏时建议将血清浓度提高至20%,待细胞可以正常聚集生长后再将血清浓度恢复至10%; 6.建议悬浮细胞密度维持在1E5-5E5/mL之间,密度过低或者过高可能会影响细胞状态;
我们推荐使用尚恩生物 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞专用培养基(产品货号:SNLM-195)作为NK-92MI(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞)的专用培养基。