一、SF9细胞基本属性 |
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细胞名称 | SF9(昆虫卵巢细胞) |
细胞别称 | SF9;sf9;SF-9;Sf-9;sf-9;Sf9;Spodopterafrugiperdaclone9;Sfclone9;IPLB-Sf-9AE;IPLB-SF-9AE;IPLB-SF-9;IPLB-Sf-9;IPLB-Sf9 |
细胞货号 | SNL-170 |
来源 | 卵巢;自发永生;雌性;蛹 |
细胞形态 | 圆形/上皮细胞样 |
细胞类型 | 正常细胞 |
生长特性 | 半贴壁细胞 |
收录 | ATCC |
生物安全等级 | 1 |
致瘤性 | |
培养条件 | Grace's Insect Medium(Supplemented)+10% FBS+1% P/S或SF-900? II SFM+1% P/S |
培养环境 | 28℃;100%空气;饱和湿度 |
细胞简介 | SF9细胞来源于雌性草地贪夜蛾蛹的卵巢组织,细胞对核多角体病毒、圣路易斯脑炎病毒敏感。SF9细胞于28℃空气培养,静置培养时贴壁或悬浮生长,亦可摇瓶悬浮培养。SF9细胞可用于复制杆状病毒表达载体,也是一种合适的转染宿主。 |
二、SF9细胞培养操作 |
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换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.轻轻吸走培养上清,留2-3ml培养基轻轻吹打细胞面吹下细胞; 2.混匀细胞,收集细胞培养基,900rpm离心3-5min,弃上清; 3.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 4.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 半贴壁细胞会附着瓶底,但贴壁不紧,轻轻吸取培养基轻轻吹打细胞面就会脱落,不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养,更适合吹打细胞操作,吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响。 |
三、SF9细胞冻存操作 |
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冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
Tips:1.细胞半贴壁圆形或多角形生长,部分悬浮圆形,传代时均可收集培养,换液时将悬浮细胞离心收集后重新接回原瓶,若贴壁细胞较多活性较好时可以不要悬浮的细胞; 2.该细胞对胰酶比较敏感,胰酶消化后细胞形态会更多梭形,贴壁变紧,传代不建议使用胰酶消化该细胞; 3.该细胞28度培养,建议27.5-28度之间,超过28度细胞状态会受损无法恢复,低于27度细胞生长速度会变慢,但恢复温度后可以恢复生长; 4.该细胞低密度时生长很慢,注意控制传代密度不要过低; 5.细胞可以使用Grace补充型培养体系培养,亦可使用SF900II等无血清培养体系培养,无血清培养体系培养时若状态不佳可以补加2-5%血清以调整细胞状态;
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