一、NR8383细胞基本属性 |
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细胞名称 | NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞) |
细胞别称 | NR-8383;NR8383;NR8383.1;AgC11x3A;NormalRat, August3, 1983 |
细胞货号 | SNL-028 |
来源 | 巨噬细胞;自发永生;SD大鼠;成年 |
细胞形态 | 圆形为主,悬浮或附着瓶底 |
细胞类型 | 正常细胞 |
生长特性 | 悬浮细胞 |
收录 | ATCC |
生物安全等级 | 1 |
致瘤性 | |
培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
细胞简介 | NR8383细胞来源于正常成年SD大鼠肺灌洗时的肺泡巨噬细胞,再通过有限稀释从单个细胞亚克隆,最后从软琼脂亚克隆三次建立。NR8383细胞在Gerbil肺细胞连续培养液里培养了8-9个月后,不再需要外源生长因子。NR8383细胞表现出巨噬细胞的特性:吞噬酵母多糖和铜绿、非特异性脂酶活性、Fc受体、氧化降解;分泌IL-1、TNF-β和IL-6,可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素,分泌TNF-β前体,在博莱霉素刺激下,TNF-β mRNA表达也上升。NR8383细胞对内毒素敏感,1-10ng/mL的LPS抑制增殖达50%;即使达到10ng/mL的水平,LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞是一种高响应的均一来源肺泡巨噬细胞模型,可以用于体外研究巨噬细胞相关活性,此细胞悬浮-贴壁混合生长。 |
二、NR8383细胞培养操作 |
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换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 1.混匀细胞,收集细胞培养基,900rpm离心3-5min,弃上清; 2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里; 3.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养; |
注意事项 | 部分悬浮细胞会附着瓶底,轻轻晃动培养基或者吹打细胞面就会脱落,不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养,更适合吹打细胞操作,吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、NR8383细胞冻存操作 |
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冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
冻存方法 | 1.离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞; 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管; 3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80 度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20 度静置 2h 后转入-80 度过夜,第二天转入液氮保存。 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
Tips:1.细胞悬浮生长,形态各异,偶有小聚团,部分细胞附着瓶底,细胞间隙碎片较多; 2.圆形透亮、细胞膜完整的细胞是活细胞,如果无法判断,可以取少量细胞用台盼蓝染色后计数确定细胞活率; 3.悬浮细胞密度维持1E5-5E5/mL之间,密度过低或者过高可能会影响细胞状态;
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