血清使用前需不需要灭活? 一般培养细胞所使用的血清不需要灭活,灭活会导致血清部分营养损失、沉淀增多,灭活的优势(主要是灭活补体以免影响细胞生长)在实际培养过程中对于促进细胞生长并没有太大意义。部分细胞对于生长条件敏感,可以尝试灭活血清培养,但大部分细胞并不需要。
血清融化后有沉淀怎么办?影响细胞培养吗? 血清沉淀主要是纤维蛋白等蛋白、磷酸盐、脂类等经冻融后析出,导致血清内出现沉淀现象,该现象与血清品质无关,大部分品牌的血清都会有这种情况,不会影响细胞培养,只是培养时可能偶尔观察到血清沉淀,注意区分血清沉淀和细胞污染即可。
胰酶用0.05%还是0.25%的?需不需要含酚红的? 胰酶浓度没有具体要求,只要消化活性合适,0.05%还是0.25%均可用于细胞消化,控制好细胞消化时间即可,部分贴壁较弱的细胞使用0.05%胰酶更容易控制消化时间。
消化使用的胰酶是含EDTA还是不含的? 含EDTA的胰酶消化活力会比不含EDTA的强,消化同种细胞时含EDTA的胰酶消化时间会比不含EDTA时间短,实际消化后细胞状态不会有太大差异,注意控制消化时间即可。
细胞培养基中L-谷氨酰胺需要加吗? L-谷氨酰胺(L-Glutamine)是细胞代谢中一种重要的营养物质,其不仅是细胞的能量来源,还参与蛋白质合成和核酸代谢,?缺乏L-谷氨酰胺会导致细胞生长不良甚至死亡。
SH-SY5Y、AR42J、C4-2等细胞总是聚集生长,中心变暗,还总爱飘,生长很慢怎么处理? 该类细胞注意接种密度不要过高否则极易成团,也可以使用多聚赖氨酸、胶原等包被过的培养瓶或者购买成品的高吸附培养瓶培养细胞,培养时可以适当提高血清浓度以促进细胞贴壁及增殖。
细胞传代后增殖变慢,即使添加血清也未见明显增殖是什么原因? 由于不同品牌、批次的培养基及血清实际培养效果差异,细胞在更换培养条件后可能生长状态改变,生长速度变慢、甚至不长的情况时有发生,此时建议及时更换合适的培养基及血清,或使用尚恩生物原装培养基培养细胞对比。
贴壁细胞总有部分圆形的还会有一些漂浮的是正常的吗? 一些新增殖的细胞或由于局部空间不足被挤出的细胞,只要细胞持续增殖,都会有一些圆形细胞或脱落漂浮细胞,不影响细胞整体增殖和实验,保持正常换液、传代周期即可。