解析:细胞生长缓慢的原因

就一个实验室而言无论运作的多么好,总会因为革新技术或拓展方向二影响原来的流程,从而产生各种各样的问题。有些地方错误的操作有可能带来严重的后果,那么今天主要列举细胞生长缓慢的两大原因。
培养体系出现问题
01检查你所培养的细胞是否存在污染。
(1)如果培养细胞未添加抗生素,细胞污染则是不可避免的。
① 用肉眼和显微镜进行检查。
② 如果细胞被污染则要弃掉。
(2)由于支原体污染不容易觉察到,因此必须定期检测。
(3)检测可能污染的途径和原因。
02检查你用于培养细胞的培养基和血清(例如:是否批次不同或厂商不同)。如果你常规使用的是粉剂或10×储存液,而现在购买的培养基更换为1×液体,而随后证明问题就出自于此。
03如果问题与培养基无关,那么很可能还是细胞的问题。
(1)复苏另一支冻存的细胞,并且与正在培养的细胞加以比较。两种细胞的培养应分开,以免在培养之初就产生污染。随后按(2)~(4)步的方法做排查。
(2)对传代培养的细胞进行计数,并绘制生长曲线,与以前培养该细胞的资料进行比较,检查是否有下列改变:
① 传代时是否接种密度过低。
② 细胞传代是否过于频繁。
③ 传代前细胞平台期是否过长。
(3)是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批号,检查批号和供货商。
(4)是否细胞分离过程中严重损伤了细胞,应检测:
① 胰蛋白酶(其他消化试剂)消化时间是否过长。
② 消化液的浓度和活性是否过高、过强。
③ 胰蛋白酶消化时,孵箱温度是否过高。
④ 吹打消化细胞时是否过于用力。
⑤ 细胞是否对 EDTA过于敏感(如果添加了EDTA)。
⑥ 胰蛋白酶稀释是否有误。
⑦ 是否使用了一批劣质的胰蛋白酶消化液。

02检查共用的设备和试剂
温度和孵箱湿度
01温度设定不准
a 自动调温器损坏。
b 开关孵箱门过于频繁。
c 孵箱门未关紧。
d 风扇损坏造成散热不均。
02孵箱湿度不能维持
a 水盘中未加水。
b 孵箱有渗漏。
c 开关孵箱门过于频繁。
d 在Petri培养皿中放置一定量的PBS,每日称重,以检查蒸发率。
03孵箱的CO2浓度不准
a 开关孵箱门过于频繁。
b CO2控制器出现问题。

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