养出形态漂亮的细胞因素之“吹打”和“二传”

有些人总会遇到细胞形态不好的问题，这个其实是有一个我自己用的小技巧可以改善的。首先，正式传代前进行“预吹打”，可以洗掉一部分多余细胞团和表面异物等；然后在传代之后进行“二传”，即滤掉那些贴壁缓慢、状态较差的虚弱细胞。
对于细胞形态不好的贴壁细胞，譬如细胞形态不清晰，表面似有异物等，可以在传代的时候进行如下操作：
首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞我们只吹打，不消化的）
其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。这种方法我自己称之为“二传”。
如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意结合细胞喜欢的生长环境培养。喜欢细胞数量多一点才能长得好的细胞，就等贴壁细胞沉淀贴壁数量比较多点的时候再传。反之亦然。细胞
另外，补充换液传代时候洗瓶的问题。这个发现没有经过大规模验证。
对于用DMEM培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清1640去洗细胞在随即后的几次中会比用DMEM洗的长的要好。同样，用1640培养的也有这个现象。
如果不嫌麻烦的话，可以用PBS来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。