武汉尚恩生物：小鼠流式标志物选择指南

　　在小鼠相关细胞的流式研究中，我们经常发现一些小鼠细胞采用了不同于人源细胞的标志物抗体。为什么同样类型的细胞，人源和小鼠源会采用不同的标志物？甚至不同品系小鼠相同类型的细胞，都会采用不同的标志物？接下来我们了解下都有哪些常见的小鼠特有标志物，为什么要用这些标志物。

　　一、B细胞

　　人源标志物：CD19、CD20

　　小鼠源标志物：CD19、B220(CD45R)

　　这是最经典的例子。在B细胞检测中，人B细胞的核心是CD19和CD20，而人源细胞也不表达B220(CD45R)；在小鼠中，情况却有所不同，虽然CD19依旧重要，但小鼠CD20仅在B细胞发育的较晚阶段（从前B细胞晚期开始）才开始表达，这意味着它无法标记早期的B祖细胞，会遗漏一部分B细胞群体，同时小鼠几乎所有B细胞都高表达B220（CD45的一种剪接变体）故而成为小鼠B细胞最佳检测标志物。

　　（小鼠细胞采用B220+确认B细胞，CD20+确认B细胞发育的较晚阶段）

　　二、NK细胞

　　人源标志物：CD56(NCAM)

　　小鼠源标志物：NK1.1(NKR-P1C)/NKp46(NCR1)/CD49b(DX5)

　　NK细胞检测时，人源和小鼠源的定义性标志有显著不同。人NK细胞根据CD56表达密度分亚群（CD56bright/CD56dim），是人NK细胞分型的核心标志物。小鼠无CD56同源物作为标志，常用NK1.1(NKR-P1C，仅限C57BL/6等部分品系，BALB/c等品系缺失)、NKp46(NCR1、CD335，所有品系小鼠以及人类中都保守的)，或更通用的CD49b(DX5，几乎所有品系成熟NK细胞都表达，但也表达于某些活化T细胞、嗜碱性粒细胞等，同时不标记组织驻留NK细胞（如肝NK）)。

　　（小鼠NK细胞检测采用NK1.1+NKp46(CD335)+）

　　三、巨噬细胞

　　人源标志物：CD68

　　小鼠源标志物：F4/80、CD68

　　F4/80是小鼠组织驻留巨噬细胞的标志性分子，在所有经典的组织驻留巨噬细胞上极高表达（如腹腔巨噬细胞、肝脏Kupffer细胞、小胶质细胞、肺泡巨噬细胞等），F4/80与CD11b结合(CD11b+F4/80hi)是鉴定和分选组织巨噬细胞的金标准。人源细胞缺少F4/80表达，因此巨噬细胞通常使用CD68标记巨噬细胞，小鼠巨噬细胞亦可采用CD68标记。

　　（小鼠巨噬细胞检测采用F4/80+CD11b+区分其他单核细胞）

　　四、其他类型

　　除以上类型的细胞外，还有其他类型细胞，在人源和小鼠源检测流式标志物时有差异，例如：

　　浆细胞样树突状细胞：小鼠源通常检测B220(CD45R)、Siglec-H、PDCA-1(BST2)，人源通常检测CD123(IL-3Rα)、CD303(BDCA-2)、CD304(BDCA-4)；

　　中性粒细胞：小鼠源通常检测Ly-6G，人源通常检测CD15(Lewis X)、CD16(FcγRIII)；

　　活化/记忆T细胞亚群：小鼠源通常检测CD62L和CD44，人源通常检测CD45RA和CD45RO；

　　因此，在检测细胞流式标志物时，必须摒弃简单的“名称对应”思维，转而采用“功能/细胞类型对应”的思维，必须要查阅文献了解清楚物种背景，选择合适的标志物，尤其是在跨种属对比检测时，一定要选择在两者上都表达且功能保守的分子作为参照。