自己冻存的细胞总是复苏不好怎么办？

细胞冻存是细胞培养比较大的难点，由于不同细胞特性不同，实际冻存效果也会有差异，如果发现细胞冻存有异常，需尽量调整冻存策略以保证细胞冻存效果。冻存细胞时应注意以下情况：
(1)细胞冻存时密度不要太高，培养基不要太黄，尽量保证细胞状态最好时冻存。若细胞密度偏高，培养基已经略微变黄，细胞状态正常，需要换液后2h以上再冻存细胞；若已完全变黄，细胞死亡超过20%，需要传代后再重新培养至状态正常后再冻存细胞；
(2)冻存过程中涉及消化操作，消化时间及吹打力度一定要控制好；
(3)冻存液建议按合适比例提前配好4度保存备用；
(4)细胞加入冻存液混匀后，冻存管依次在4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。有程序降温盒的实验室，可以混合细胞与冻存液后，将冻存管放入程序降温盒中，再将程序降温盒放-80度过夜，之后将细胞转入液氮，程序降温盒应注意定期更换异丙醇；
(5)细胞在-80度过夜后，建议及时转入液氮保存。-80度只能短期保存，一般不建议超过一周，最好2-3天内转入液氮，越早越好。