实验干货 | B16(小鼠黑色素瘤细胞)成瘤攻略 - 武汉尚恩生物技术有限公司

一、细胞基础信息

细胞名称：B16（小鼠黑色素瘤细胞）

细胞别称：B-16；B16 melanoma；B16 subline B78；B78

细胞货号：SNL-115（RRID：CVCL_F936）

培养基：1640 + 10% FBS + 1% P/S

培养环境：37℃；5% CO₂；饱和湿度

二、细胞背景

B16 细胞是一株来自 C57BL/6 小鼠皮肤的黑素瘤细胞，黑色素生成阳性，但大部分细胞无色素。据报道，细胞在部分培养条件下可能分泌大量黑色素。尚恩生物确认细胞使用 DMEM（GIBCO 12800082）培养时出现过大量黑色素表达情况，但后续未经复测；另外无论细胞是否在体外培养时产生黑色素，接种至 C57BL/6 小鼠体内后，瘤体均呈黑色。B16 可用于皮肤癌研究，也是一种合适的转染宿主。

三、尚恩说明

尚恩生物仅进行小鼠背部皮下成瘤实验，其他部位成瘤实验建议参考文献资料并在有丰富经验的技术人员指导下进行操作；

成瘤实验受细胞活性、细胞数量、小鼠状态、个人操作等多方面因素影响，本文内容作为尚恩生物成瘤实验情况介绍，仅供参考；

尚恩生物始终秉持对实验动物高度敬重的心态，致敬每一只为人类科研事业献身的实验动物。本文相关操作遵循实验动物福利规范，由实验动物专业人员操作，内容仅限科研人员交流心得，禁止以猎奇心态传播本文内容。

四、成瘤操作

① B16 细胞采用 10 cm 培养皿贴壁培养；

② 细胞培养到 80% 左右密度时，消化细胞收集细胞悬液；

③ 细胞悬液 900 rpm 离心 3 min，用 4–5 mL PBS 重悬细胞；

④ 再次 900 rpm 离心 3 min，用 0.5 mL PBS 重悬细胞；

⑤ 取少量 PBS 重悬的细胞进行计数及活率检测，根据计数结果，按 100 万/只小鼠活细胞悬液；（取出的单只小鼠所需细胞悬液体积低于 100 μL 可补加 PBS 至 100 μL，超过 200 μL 需离心收集沉淀并用 100 μL PBS 重悬，体积介于 100–200 μL 可直接正常注射）

⑥ 使用 1 mL 注射器吸取细胞悬液，注射到小鼠皮下或其他部位；

⑦ 观察记录小鼠瘤体生长情况，通常实验建议小鼠瘤体不大于 20 mm，重量不超过小鼠体重 10%，具体规定以各单位实验动物伦理委员会审查标准略有差异，建议提前咨询。