01细胞背景
VX2细胞建立于1938年开始的VX2（V2）可移植肿瘤，具体肿瘤来源不明，有多种细胞形态的报道。VX2细胞兔皮下、肌肉、肝脏、肺等部位移植100%成瘤，皮下或肌肉移植100%肺转移。尚恩生物提供的VX2瘤组织经1kg-1.5kg雌性新西兰大耳兔皮下成瘤实验验证，冻存的单管瘤细胞可以注射2-3只兔，4-6周可显著成瘤并收获瘤体，取瘤体细胞分散重悬过细胞筛后制成细胞悬液，再次注射成瘤时间更短（注意若注射部位太深可能在兔表皮看不到明显成瘤迹象，可以通过解剖或B超检查成瘤情况）。
02尚恩说明
1.尚恩生物仅进行兔大腿皮下、肌肉成瘤实验，其他部位如肝脏、肺等成瘤实验建议参考文献资料并在有丰富经验的技术人员指导下进行操作；
2.尚恩生物VX2瘤组织（SNL-211A）仅提供干冰发货的冻存细胞，干冰费另付；
3.每份产品内含2支冻存的VX2瘤组织悬液，默认发同批次细胞，批次剩余数量不足时可能混合批次发货；2支细胞属于保障性发货，任意一支成瘤成功另一支即失去售后权益，若需保存细胞建议取瘤体自行研磨分散并冻存保存；
4.建议先复苏一只按操作步骤进行成瘤实验，另一支保存于液氮环境，若无法成瘤尽快联系销售人员处理，在尚恩生物计数支持指导下，进行另外一支的复苏及成瘤操作；
5.冻存管内为瘤组织经研磨分散、筛网过滤的细胞悬液，可以直接通过1mL移液器吹打混匀并通过0.6#针头注射，若冻存复苏后出现大量细胞聚团导致无法通过针头吸取，可以在100-200目的无菌滤网上重新研磨过滤；
6.通常前3周内瘤体发展较慢，3-4周及以后会有明显瘤体生长迹象，瘤体生长到鹌鹑蛋大小即可收获，过大的瘤体内部会出现坏死现象；
03成瘤操作
1.收货后拆开外包装，取出2支冻存细胞，临时保存可以在-80℃保存3天，长期保存必须保存在充足液氮中；
2.准备好1-1.5kg的新西兰兔或日本大耳兔，适应饲养3-5天；
3.37度水浴融化，水浴过程注意快速摇晃以加速融化，融化后尽快取出；
4.将冻存管放入离心机，离心力150g(约900rpm)左右，1min；
5.冻存管表面消毒，打开冻存管弃上清；
6.加入1mL PBS轻轻重悬细胞沉淀，重悬后再次900rpm离心1min，弃上清；
7.再次加1mL PBS轻轻重悬细胞，吸入5mL(0.6#针头)注射器，尽快注射至兔肌肉或皮下，每只冻存管细胞可以接种2-3只兔；
04成瘤记录
1第一阶段●2026.4.8一支细胞注射2只兔子，前三周没有明显成瘤迹象；
2第二阶段●2026.5.6第四周开始有明显成瘤迹象，成瘤部位隆起；
3第三阶段●2026.5.15周处死兔子取瘤体(约鹌鹑蛋大小)研磨分散200目细胞筛过滤，收集悬液离心弃上清，用冻存液重悬冻存或用PBS重悬重新成瘤注射；
05细胞冻存
1.收集经过研磨分散的细胞悬液，1500rpm离心5min，弃上清；
2.获得细胞沉淀后，PBS重悬细胞计数并再次离心，采用92%FBS+8%DMSO冻存液重悬细胞，建议一管冻存2X107-5X107细胞；
3.分装入标记好的细胞，放入程序降温盒，一起放入-80℃冻存过夜后，转移入液氮保存；
06注意事项
1.皮下、肌肉注射成瘤时使用75%酒精棉消毒皮肤并充分暴露，确保细胞悬液完全注入指定位置，因细胞悬液部分或全部未注射到动物体内导致的成瘤缓慢或无法成瘤不属于售后范围；
2.饲养过程中需保持饲养环境稳定、清洁，食物、水充足且干净；
3.探查瘤体时，用手指轻柔探查，禁止大力捏成瘤区域避免瘤体破损导致成瘤失败或感染；
4.瘤体注射位置较浅时或瘤体较大时可能出现皮肤破损，可以使用碘伏消毒并建议尽早取瘤体避免感染；