发货形式 | T25瓶 | 冻存管 | |
1 | 快递保存温度 | 室温 | 液氮长期保存或-80度3天以内 |
2 | 初步平衡 | T25瓶表面消毒后,放37度培养箱平衡复温2h以上 | 无须平衡,直接放入-80冰箱或者液氮罐保存 |
3 | 处理方式 | 吸走大部分培养基离心备用(若悬浮细胞较多可以离心收集上清的细胞接种回原瓶),留10-12ml培养基,拍照并观察细胞。密度80%以上即可吸走培养基传代,若密度低于80%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上再进行传代培养 | 水浴(水浴温度参考培养温度)摇晃尽快融化细胞,直接在冻存管内将细胞离心。离心转速以离心力150g(约900rpm)左右,1min为宜,弃上清,沉淀用新鲜培养基重悬后接种,显微镜下观察细胞并拍照,24h后换液一次 |
4 | 接种方式 | T25传代首次建议1:2传代,即瓶T25传成两瓶(不可传代细胞忽略消化传代步骤及传代比例,可以混匀细胞后按实验需求接种到其他培养容器) | 可以计数后按实际需要接种到相应培养容器内或一管细胞建议直接接种到T25瓶或6cm皿,接种24h后观察细胞情况并拍照 |
5 | 注意事项 | 若细胞出现漂浮,T25瓶不开封,放至培养箱过夜,若细胞贴壁即说明活性正常,按正常操作吹散传代即可;若未贴壁,收集细胞培养基离心后,将细胞重悬接种到新的培养瓶中,同时原瓶还贴壁的细胞加培养基继续培养 | 收货时若发现干冰化完,检查冻存管是否融化,若已融化需直接离心细胞接种观察,若未融化可以将细胞按正常步骤保存,以上情况及时反馈 干冰发货的细胞只能在-80保存3天左右,长时间保存会出现活性下降。 |
特殊情况:
1.若培养瓶或者冻存管出现破碎或漏液情况,及时拍照联系销售反馈,按指导进行进一步处理。若只是外包装破损一般不影响培养瓶和冻存管,请放心使用。
2.若无法观察到细胞,建议收集细胞培养基,1200rpm离心5min,观察细胞沉淀量,并用少量培养基重悬沉淀后,取部分悬液放到计数板或者载玻片上观察细胞。
3.部分细胞增殖较快,发货细胞量较多时,培养基可能出现颜色变黄现象。继续培养使用此类培养基时,需要及时观察培养基颜色变化,缩短培养基换液周期,并每瓶多加2-3ml培养基。
4.收货当天不处理细胞时,T25瓶可以消毒拆封口膜后不拧开瓶盖放37度培养箱静置过夜,但不建议超过24h;冻存管可以直接放液氮长期保存或-80度3天以内,必须一周内复苏培养检查,否则将超过一周售后期。