1.细胞培养需要充足经验,新手或者没有类似细胞培养经验的人建议在专业人士指导下进行操作,尤其注意无菌操作、贴壁细胞消化时间及细胞培养密度。
2.部分细胞在传代后时,会有以下现象:细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞。以上都是细胞培养常见现象,不影响细胞增殖和实验。
3.细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡、细胞器折光或者细胞膜表面物质,这个属于细胞自身特性,无法清除也无法改变,具体情况可以参考ATCC、DSMZ等大型细胞库细胞照片。细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片,可以吸走培养基收集起来,用PBS润洗剩余贴壁细胞(润洗液可以视贴壁细胞损失量收集起来);然后将收集的培养基和润洗液中的悬浮细胞混匀,细胞悬液900-1000rpm(约150g)离心3min,弃上清。再加5ml PBS重悬细胞,再离心后,用完全培养基重悬接种回去。第二次PBS重悬是为了去除碎片,如果平时碎片比较少,传代时可以省略PBS重悬的步骤;如果碎片很多,建议PBS多洗几次。
4.半贴壁细胞培养会有部分细胞悬浮,悬浮细胞可以收集起来用于传代培养,若贴壁细胞较多状态良好时,可以不搜集悬浮细胞以简化操作步骤。
5.半贴壁及悬浮细胞生长相对脆弱,吹打力度不要过大,不要产生过多气泡,否则会严重影响细胞状态。
6.细胞生长偏慢时,可以提高5-10%血清浓度(血清总浓度不超过20%)培养一段时间,待细胞状态和生长速度恢复正常后换回正常血清浓度。