一、NR8383细胞基本属性 |
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| 细胞名称 | NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞) |
| 细胞别称 | NR-8383; NR 8383; NR8383.1; AgC11x3A; Normal Rat; August 3; 1983 |
| 细胞货号 | SNL-028 |
| 来源 | 巨噬细胞；自发永生；SD大鼠；成年 |
| 细胞形态 | 巨噬细胞样 |
| 细胞类型 | 正常细胞 |
| 生长特性 | 悬浮细胞 |
| 收录 | ATCC |
| 生物安全等级 | 1 |
| 致瘤性 | |
| 培养条件 | 1640+10% FBS+1% P/S |
| 培养环境 | 空气，95% ； 二氧化碳 (CO2)，5% |
| 细胞简介 | NR8383细胞来源于正常成年SD大鼠肺灌洗时的肺泡巨噬细胞，再通过有限稀释从单个细胞亚克隆，最后从软琼脂亚克隆三次建立。NR8383细胞在Gerbil肺细胞连续培养液里培养了8-9个月后，不再需要外源生长因子。NR8383细胞表现出巨噬细胞的特性：吞噬酵母多糖和铜绿、非特异性脂酶活性、Fc受体、氧化降解；分泌IL-1、TNF-β和IL-6，可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素，分泌TNF-β前体，在博莱霉素刺激下，TNF-β mRNA表达也上升。NR8383细胞对内毒素敏感，1-10ng/ml的LPS抑制增殖达50%；即使达到10ng/ml的水平，LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞是一种高响应的均一来源肺泡巨噬细胞模型，可以用于体外研究巨噬细胞相关活性，此细胞悬浮-贴壁混合生长。 |
二、NR8383细胞培养操作 |
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| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清； 2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 3.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
三、NR8383细胞冻存操作 |
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| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：1.细胞悬浮生长，形态各异，偶有小聚团，部分细胞附着瓶底，细胞间隙碎片较多； 2.圆形透亮、细胞膜完整的细胞是活细胞，如果无法判断，可以取少量细胞用台盼蓝染色后计数确定细胞活率； 3.悬浮细胞密度维持1E5-5E5/ml之间，密度过低或者过高可能会影响细胞状态；
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